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鼠源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒檢測樣品RNA的抽提方法

發(fā)表時間:2023-03-15
鼠源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒檢測樣品RNA的抽提方法:

①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其完全溶解。

②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的氯仿,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚氯仿相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。

③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。

④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。

⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。

⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其完全溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
甲巰咪唑 英文名稱: Methimazole CAS號: 60-56-0 分子式: 114.17 分子量:
苯丙酸諾龍 英文名稱: Nandrolone phenylpropionate CAS號: 62-90-8 分子式: 406.56 分子量:
二苯基-(2-氯苯基)甲醇 英文名稱: Two phenyl - (2-) methanol CAS號: dfhh 分子式: 分子量:
醋酸氟輕松 英文名稱: Fluoride acetate CAS號: 356-12-7 分子式: 494.52 分子量:
丙酸睪丸素 英文名稱: Testosterone propionate CAS號: 57-85-2 分子式: 344.49 分子量:
紫杉醇 英文名稱: Taxol CAS號: 33069-62-4 分子式: 853.91 分子量:
紫丁香苷 英文名稱: Purple Lilac CAS號: 118-34-3 分子式: 372.37 分子量:
紫草酸 英文名稱: Purple oxalic acid CAS號: 28831-65-4 分子式: 538.46 分子量:
紫草素 英文名稱: Shikonin CAS號: 517-89-5 分子式: 288.3 分子量:
梓醇 英文名稱: Catalpol CAS號: 2415-24-9 分子式: 362.33 分子量:
豬去氧膽酸 英文名稱: Hyodeoxycholic Acid CAS號: 83-49-8 分子式: 392.57 分子量:
梔子甙 英文名稱: Gardenia CAS號: 24512-63-8 分子式: 388.37 分子量:
芝麻素 英文名稱: Sesame seed CAS號: 607-80-7 分子式: 354.35 分子量:


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