產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP6683 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用于科研 |
包裝規(guī)格 | 50T |
純度 | 詳見說明書% |
CAS編號 | |
是否進(jìn)口 | 是 |
熒光定量PCR服務(wù):
簡介:實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出,該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規(guī)PCR相比,它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點(diǎn),目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化;比較不同組織的mRNA表達(dá)差異;驗(yàn)證基因芯片,siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成,主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務(wù)要求:
(01)請您提供新鮮的且盡量多的材料;或直接提供純化好的總RNA(大于 5 ug/樣品);或直接提供純化好的DNA(大于 5 ug/樣品)。
(02)請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。
(03)請?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料:DNA/RNA 來源等
2、產(chǎn)品僅供科研使用熒光定量PCR操作程序
(01)引物(探針)設(shè)計(jì)與合成。
(02)提取DNA/RNA,樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。
(03)進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn),進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。
(04)實(shí)驗(yàn)完成后,提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告(含軟件分析結(jié)果)及引物等實(shí)驗(yàn)材料。
3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn):
我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖:
概述:
熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過程中,隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增,PCR產(chǎn)物不斷積累,熒光信號也會相應(yīng)的增加,這樣就可以通過熒光強(qiáng)度的變化來對PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實(shí)現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
綿羊附紅細(xì)胞體探針法熒光定量PCR試劑盒 | Eperythrozoon ovis | BKP6683 |
使用方法:
一、綿羊附紅細(xì)胞體探針法熒光定量PCR試劑盒稀釋PCR陽性對照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
2. 標(biāo)記6個離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品,必須設(shè)置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?/span>10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于1萬拷貝)或第5號(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)(20 μL體系,在樣品制備室進(jìn)行)
10. 如果只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照,6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復(fù),則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。
11. 產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加)
實(shí)驗(yàn)過程:
產(chǎn)品僅供科研使用一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允?/span>DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。zui好設(shè)立一個專用的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
實(shí)時熒光定量PCR:
實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測的局限,實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強(qiáng)度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計(jì)算,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此,實(shí)時熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個基礎(chǔ)之上的:
1)Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期(對數(shù)期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性極好,即同一模板不同時間擴(kuò)增或同一時間不同管內(nèi)擴(kuò)增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系,可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進(jìn)行定量測定,因此,實(shí)時熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確,重現(xiàn)性*的定量方法,已得到全世界的公認(rèn),廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究,藥物考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。
小鼠酪蛋白酶ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 Ethyl glucoside 3198-49-0 中文名:乙基葡萄糖苷 分子式:C8H16O6
小鼠可溶性血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子elisa試劑盒 小鼠可溶性血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 小鼠可溶性血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:小鼠可溶性血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子試劑盒、小鼠可溶性血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個月。 Bromhexine 中文名:鹽酸溴己新 分子式:C14H21Br2ClN2
小鼠可溶性血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 Makisterone A 20,22-monoacetonide 245323-24-4 中文名: 分子式:C31H50O7 度:% 關(guān)鍵詞:
小鼠可溶性血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)ELISAKit ELISA. 96T/48T Ethyl rutinoside 中文名:蕓香糖乙苷 分子式:C14H26O10
小鼠可溶性細(xì)胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 Makisterone A 20,22-monoacetonide 245323-24-4 中文名: 分子式:C31H50O7
Gimeracil 103766-25-2 中文名:吉莫斯特 分子式:C5H4ClNO2 度:98.0% 關(guān)鍵詞: 小鼠酸性成纖維生長因子(mouse a-FGF) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進(jìn)口分裝
Gemcitabine 95058-81-4 中文名:吉西他濱 分子式:C9H11F2N3O4 度:98.0% 關(guān)鍵詞: 小鼠堿性成纖維生長因子(mouse b-FGF/FGF-2) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進(jìn)口分裝
Gefitinib 184475-35-2 中文名:吉非替尼 分子式:C22H24ClFN4O3 度:98.0% 關(guān)鍵詞: 小鼠Fibronectin(mouse Fibronectin) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進(jìn)口分裝
Gatifloxacin Mesylate 316819-28-0 中文名:甲磺酸加替沙星 分子式:C20H26FN3O7S 度:98.0% 小鼠Flt3(mouse Flt3) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進(jìn)口分裝
Ganciclovir 82410-32-0 中文名:更昔洛韋 分子式:C9H13N5O4 度:98.0% 關(guān)鍵詞: 小鼠廋素 英文名稱: Leptin 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: Leptin
甘油三酯(TG)含量測定試劑盒 可見分光光度法 50管/48樣 Atractylodin 中文名:蒼術(shù)素 分子式:C13H10O
甘油0酸 10g Androstenediol-3-acetate 中文名:雄甾烯二醇-3-乙酸酯 分子式:C21H32O3 度:98.0%
甘露聚糖結(jié)合凝集素絲酸肽酶-2 英文名稱: mannan-binding lectin associated serine proteases 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: MASP-2 3-[4-[(2-Chloro-5-iodophenyl)methyl]phenoxy]tetrahydro-furan 中文名: 分子式:C17H16ClIO2
富組酸糖蛋白 英文名稱: rich in histidine glycoprotein 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: HPRG Norethindrone 68-22-4 中文名:炔諾酮 分子式:C20H26O2 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
輔酶ⅡNADP(H)含量測試盒 可見分光光度法 50管/24樣 Pregn-5-ene-3β,17α,20S-triol 中文名: 分子式:C21H34O3
綿羊附紅細(xì)胞體探針法熒光定量PCR試劑盒4-[2-(2-Amino-4,7-dihydro-4-oxo-1H-pymol[2,3-d]pyrimodin-5-yl)ethyl]benzoic acid methyl ester 155405-80-4 中文名: 分子式:C16H16N4O3 人中性粒細(xì)胞防御素1-3elisa試劑盒 人中性粒細(xì)胞防御素1-3試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 人中性粒細(xì)胞防御素1-3試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:人中性粒細(xì)胞防御素1-3試劑盒、人中性粒細(xì)胞防御素1-3 elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個月。
Pemetrexed di 357166-30-4 中文名:培美曲塞二鈉 分子式:C21H23N5Na2O6 人中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶elisa試劑盒 人中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 人中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:人中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶試劑盒、人中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個月。
Ethyl 5-amino-4-cyano-3-(2-ethoxy-2-oxoethyl)thiophene-2-carboxylate 58168-20-0 中文名: 分子式:C12H14N2O4S 人中性粒細(xì)胞防御素1-3(HNP1-3)酶聯(lián)吸附測定試劑盒 Human HNP1-3 (Neuophil Peptide 1-3) ELISA Kit
5-Fluorouracil 51-21-8 中文名: 分子式:C4H3FN2O2 人中性粒細(xì)胞激活蛋白3(NAP3)酶聯(lián)吸附測定試劑盒 Human NAP3 (Neuophil Activating Protein 3) ELISA Kit
cis-Octahydro-isoindole 21850-12-4 中文名: 分子式:C8H15N 人中性粒細(xì)胞堿性0酸酶(NAP)酶聯(lián)吸附測定試劑盒 Human NAP (Neuophil Alkaline Phosphatase) ELISA Kit