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上海帛科生物技術(shù)有限公司
   
     
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兔附紅細(xì)胞體探針法熒光定量PCR試劑盒
  • 品牌:帛科
  • 產(chǎn)地:進(jìn)口、國產(chǎn)
  • 貨號:BKP6681
  • 價格: ¥3800/盒
  • 發(fā)布日期: 2020-06-19
  • 更新日期: 2024-12-25
產(chǎn)品詳請
產(chǎn)地 進(jìn)口、國產(chǎn)
品牌 帛科
貨號 BKP6681
用途 公司產(chǎn)品僅用于科研
包裝規(guī)格 50T
純度 詳見說明書%
CAS編號
是否進(jìn)口

概述:
熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴增過程中,隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增,PCR產(chǎn)物不斷積累,熒光信號也會相應(yīng)的增加,這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應(yīng)進(jìn)行實時的監(jiān)測。產(chǎn)品僅供科研使用本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNARNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

產(chǎn)品名稱

英文名稱

貨號

兔附紅細(xì)胞體探針法熒光定量PCR試劑盒

Eperythrozoon lenps

BKP6681

實時熒光定量PCR
實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限,實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此,實時熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個基礎(chǔ)之上的:
1
Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴增期(對數(shù)期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性極好,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增,得到的Ct值是恒定的。
2
Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系,可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進(jìn)行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確,重現(xiàn)性*的定量方法,已得到全世界的公認(rèn),廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究,藥物考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖:

使用方法:
一、兔附紅細(xì)胞體探針法熒光定量PCR試劑盒稀釋PCR陽性對照(以10E2-10E7拷貝/μL610倍稀釋度為例)
1.
注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
2.
標(biāo)記6個離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
3.
用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.
7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5.
換槍頭,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6.
換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7.
重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8.
如果有N個樣品,必須設(shè)置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)。可以用10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于1萬拷貝)或第5號(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PCNC的體積也必須是200μL。
9.
用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)(20 μL體系,在樣品制備室進(jìn)行)
10.
如果只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+9PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照,6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復(fù),則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加23倍。
11.
產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加)

熒光定量PCR服務(wù):
產(chǎn)品僅供科研使用簡介:實時熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出,該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規(guī)PCR相比,它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點,目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化;比較不同組織的mRNA表達(dá)差異;驗證基因芯片,siRNA干擾的實驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),全部實驗皆使用進(jìn)口試劑完成,主要定量PCR儀器。
1
、熒光定量PCR服務(wù)要求:
01)請您提供新鮮的且盡量多的材料;或直接提供純化好的總RNA(大于 5 ug/樣品);或直接提供純化好的DNA(大于 5 ug/樣品)。
02)請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。
03)請?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料:DNA/RNA 來源等
2
、熒光定量PCR操作程序
01)引物(探針)設(shè)計與合成。
02)提取DNA/RNA,樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。
03)進(jìn)行Real Time PCR實驗,進(jìn)行實驗結(jié)果分析。
04)實驗完成后,提供完整的實驗報告(含軟件分析結(jié)果)及引物等實驗材料。
3
、熒光定量PCR的收費標(biāo)準(zhǔn):
 
我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費標(biāo)準(zhǔn)。
小鼠粒細(xì)胞集落刺激因子   英文名稱:   granulocyte colony-stimulating factor   規(guī)格:   48T/96T   英文縮寫:   G-CSF  Benzotetramisole  中文名:苯并四咪唑  分子式:C15H12N2S  度:98.0%

小鼠類樣生長因子 -1 (mouse IGF-1)   作用:   ELISA   規(guī)格:   96T   美國 R&D  Azilsartan  147403-03-0  中文名:阿齊沙坦  分子式:C25H20N4O5 

小鼠類生長因子結(jié)合蛋白-3(mouse IGBPF-3)   作用:   ELISA   規(guī)格:   48T/96T   進(jìn)口分裝  Ethyl 5-amino-4-cyano-3-(2-ethoxy-2-oxoethyl)thiophene-2-carboxylate  58168-20-0  中文名:  分子式:C12H14N2O4S  度:98.0%  關(guān)鍵詞: 

小鼠類生長因子結(jié)合蛋白-3   英文名稱:   insulin-like growth factors binding protein-3   規(guī)格:   48T/96T   英文縮寫:   IGFBP-3  Ethyl 3-cyclopropyl-3-oxopropanoate  24922-02-9  中文名:  分子式:C8H12O3 

小鼠類生長因子結(jié)合蛋白-2(mouse IGBPF-2)   作用:   ELISA   規(guī)格:   48T/96T   進(jìn)口分裝  Ethyl 5-amino-4-cyano-3-(2-ethoxy-2-oxoethyl)thiophene-2-carboxylate  中文名:  分子式:C12H14N2O4S
Glycodeoxycholic acid  360-65-6 
中文名:甘氨脫氧膽酸  分子式:C26H43NO5  度:98.0%  關(guān)鍵詞:  膽烷; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠巨噬細(xì)胞趨化蛋白-3   英文名稱:   monocyte chemotactic protein 3   規(guī)格:   48T/96T   英文縮寫:   MCP-3

Glyceryl hexacosanoate  127098-14-0  中文名:  分子式:C29H58O4  度:關(guān)鍵詞:    小鼠M-膽堿能受體結(jié)合力   英文名稱:   Mcholinoceptor binding capacity   規(guī)格:   48T/96T   英文縮寫:   MCBC

Glycerol 1-(26-hydroxyhexacosanoate)  177602-14-1  中文名:  分子式:C29H58O5  度:關(guān)鍵詞:  植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠酸性0酸酶elisa試劑盒   小鼠酸性0酸酶試劑盒   規(guī)格型號:96T/48T   小鼠酸性0酸酶試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:小鼠酸性0酸酶試劑盒、小鼠酸性0酸酶eisa試劑盒   保存條件:2-8   保質(zhì)期:6個月。

Glycerol  56-81-5  中文名:甘油  分子式:C3H8O3  度:關(guān)鍵詞:    小鼠Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基末端肽elisa試劑盒   小鼠Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基末端肽試劑盒   規(guī)格型號:96T/48T   小鼠Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基末端肽試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:小鼠Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基末端肽試劑盒、小鼠Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基末端肽eisa試劑盒   保存條件:2-8   保質(zhì)期:6個月。

Glyburide  10238-21-8  中文名:格列本脲  分子式:C23H28ClN3O5S  度:98.0%  關(guān)鍵詞:    小鼠Ⅰ型膠原N末端肽elisa試劑盒   小鼠Ⅰ型膠原N末端肽試劑盒   規(guī)格型號:96T/48T   小鼠Ⅰ型膠原N末端肽試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:小鼠Ⅰ型膠原N末端肽試劑盒、小鼠Ⅰ型膠原N末端肽eisa試劑盒   保存條件:2-8   保質(zhì)期:6個月。
桿菌肽   50KU  4,6-Dichloro-5-nitro-2-propylthiopyrimidine  中文名:  分子式:C7H7Cl2N3O2S  度:98.0%

肝脂酶/脂蛋白脂酶檢測   Lipofuscin (excluding colorimeic detection)  Racecadotril  中文名:消旋卡多曲  分子式:C21H23NO4S 

肝素溶液   Heparin solion  Ampicillin Trihydrate  7177-48-2  中文名:氨芐西林三水酸  分子式:C16H19N3O4S 

肝素抗凝管   Heparin aicoagula tube  Amoxicillin trihydrate  中文名:羥氨芐青霉素三水合物  分子式:C16H19N3O5S  度:98.0%

肝素抗凝管   Heparin aicoagula tube                 Amoxicillin trihydrate  中文名:羥氨芐青霉素三水合物  分子式:C16H19N3O5S
兔附紅細(xì)胞體探針法熒光定量PCR試劑盒2,2-Diphenylglycine  3060-50-2  中文名:  分子式:C14H13NO2    人重去甲上腺素(NE-B)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Phenytoin  57-41-0  中文名:苯妥英  分子式:C15H12N2O2    人生長因子(TAF)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Androstadienedione  897-06-3  中文名:1,4-雄烯二酮  分子式:C19H24O2    人相關(guān)抗原(TAA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Nandrolone  434-22-0  中文名:諾龍  分子式:C18H26O2    人特異性抗原(TSA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

Guaiacol glycidyl ether  2210-74-4  中文名:  分子式:C10H12O3    人中性粒細(xì)胞趨化蛋白2(NAP-2/CXCL7)ELISAKit   ELISA.   96T/48T
實驗過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA
模板
2
.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允?/span>DNA也可以是RNA,一般20bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3
10×PCR Buffer
4
2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP2mM
5
Taq
二、操作步驟
1
.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物110pM               2μl
引物210PM              2μl
Taq
酶(2U/μl            1μl
DNA
模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O               50 μl
PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2
.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93 40s → 58 30s → 72 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72 保溫7min
3
.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4待電泳檢測或-20長期保存。
4
PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。zui好設(shè)立一個專用的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。


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