產(chǎn)地 | 進口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP6704 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用于科研 |
包裝規(guī)格 | 50T |
純度 | 詳見說明書% |
CAS編號 | |
是否進口 | 是 |
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖:
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
埃希氏菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒 | Escherichia spp. | BKP6704 |
概述:
產(chǎn)品僅供科研使用熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴增過程中,隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增,PCR產(chǎn)物不斷積累,熒光信號也會相應的增加,這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應進行實時的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。
實時熒光定量PCR:
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限,實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據(jù)標準曲線獲得定量結果。因此,實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎之上的:
1)Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,剛剛進入真正的指數(shù)擴增期(對數(shù)期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性極好,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系,可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確,重現(xiàn)性*的定量方法,已得到全世界的公認,廣泛用于基因表達研究、轉基因研究,藥物考核、病原體檢測等諸多領域。
使用方法:
一、埃希氏菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒稀釋PCR陽性對照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例)
1. 注意:產(chǎn)品僅供科研使用由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
2. 標記6個離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品,必須設置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)。可以用10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當于1萬拷貝)或第5號(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設置qPCR反應(20 μL體系,在樣品制備室進行)
10. 如果只做1次重復,則標記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照,6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復,則反應設置數(shù)量相應增加2或3倍。
11. 產(chǎn)品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加)
熒光定量PCR服務:
簡介:實時熒光定量PCR技術于1996年由美國Applied Biosystems公司推出,該技術不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規(guī)PCR相比,它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點,目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化;比較不同組織的mRNA表達差異;驗證基因芯片,siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務,全部實驗皆使用進口試劑完成,主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務要求:
(01)請您提供新鮮的且盡量多的材料;或直接提供純化好的總RNA(大于 5 ug/樣品);或直接提供純化好的DNA(大于 5 ug/樣品)。
(02)請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。
(03)請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料:DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
(01)引物(探針)設計與合成。
(02)提取DNA/RNA,樣本逆轉錄成cDNA。
(03)進行Real Time PCR實驗,進行實驗結果分析。
(04)實驗完成后,提供完整的實驗報告(含軟件分析結果)及引物等實驗材料。
3、熒光定量PCR的收費標準:
我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準。
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允?/span>DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
小鼠抗肌內(nèi)膜抗體IgAelisa試劑盒 小鼠抗肌內(nèi)膜抗體IgA試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 小鼠抗肌內(nèi)膜抗體IgA試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進口分裝),產(chǎn)品別名:小鼠抗肌內(nèi)膜抗體IgA試劑盒、小鼠抗肌內(nèi)膜抗體IgAeisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質期:6個月。 Ergosta-5,24(28)-diene-3β,7α,16β-triol 289054-34-8 中文名: 分子式:C28H46O3 度:97.5% 關鍵詞: 麥角甾烷; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫
小鼠抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMAIgA)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 ER-878898 122111-11-9 中文名: 分子式:C20H18F2O8S 度:98.0% 關鍵詞:
小鼠抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMAIgA)ELISAKit ELISA. 96T/48T Eplerenone 中文名:依普利酮 分子式:C24H30O6 度:98.0%
小鼠抗紅細胞抗體elisa試劑盒 小鼠抗紅細胞抗體試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 小鼠抗紅細胞抗體試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進口分裝),產(chǎn)品別名:小鼠抗紅細胞抗體試劑盒、小鼠抗紅細胞抗體eisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質期:6個月。 Ergosta-5,24(28)-diene-3β,7α,16β-triol 289054-34-8 中文名: 分子式:C28H46O3
小鼠抗紅細胞抗體(RBC)ELISAKit ELISA. 96T/48T L-(+)-Arginine 74-79-3 中文名:L-(+)-精氨酸 分子式:C6H14N4O2 度:98.0% 關鍵詞:
Dorzolomide 130693-82-2 中文名:鹽酸多佐胺 分子式:C10H17ClN2O4S3 度:98.0% 關鍵詞: 小鼠甘油三酯脂肪酶 英文名稱: Mouse iglyceride Lipase 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: TGL
Donepezil 120011-70-3 中文名:鹽酸多奈哌齊 分子式:C24H30ClNO3 度:98.0% 關鍵詞: 小鼠甘油三酯 英文名稱: Mouse iglyceride 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: TG
Domperidone 57808-66-9 中文名:多潘立酮 分子式:C22H24ClN5O2 度:98.0% 關鍵詞: 小鼠狀腺原酸 英文名稱: T3 Mouse iiodothyronine 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: T3
Docosanoic acid 112-85-6 中文名:二十二烷酸 分子式:C22H44O2 度:% 關鍵詞: 小鼠狀腺原酸elisa試劑盒 小鼠狀腺原酸試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 小鼠狀腺原酸試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進口分裝),產(chǎn)品別名:小鼠狀腺原酸試劑盒、小鼠狀腺原酸elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質期:6個月。
Docetaxel 114977-28-5 中文名:多西他賽 分子式:C43H53NO14 度:98.0% 關鍵詞: 小鼠硫氧還蛋白還原酶elisa試劑盒 小鼠硫氧還蛋白還原酶試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 小鼠硫氧還蛋白還原酶試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進口分裝),產(chǎn)品別名:小鼠硫氧還蛋白還原酶試劑盒、小鼠硫氧還蛋白還原酶elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質期:6個月。
成纖維細胞生長因子2 英文名稱: Human Fibroblast Growth Factor 2 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: FGF-2 4-[2-[(3-Ethyl-4-methyl-2-oxo-3-pyrrolin-1-yl)carboxamido]ethyl]benzenesulfonamide 中文名: 分子式:C16H21N3O4S 度:98.0%
成纖維生長因子-4 英文名稱: fibroblast growth factor 4 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: FGF-4 4,4'-Bis(5-methyl-2-benzoxazolyl)stilbene 中文名:4,4'-雙(5-甲基-2-苯并惡唑基)芪 分子式:C30H22N2O2 度:98.0%
成纖維生長因子-4 英文名稱: fibroblast growth factor 4 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: FGF-4 4,4'-Bis(5-methyl-2-benzoxazolyl)stilbene 中文名:4,4'-雙(5-甲基-2-苯并惡唑基)芪 分子式:C30H22N2O2
超氧化物歧化酶測elisa試劑盒 超氧化物歧化酶測試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 超氧化物歧化酶測試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進口分裝),產(chǎn)品別名:超氧化物歧化酶測試劑盒、超氧化物歧化酶測elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質期:6個月。 Bupivacaine 18010-40-7 中文名:鹽酸布比卡因 分子式:C18H29ClN2O
超氧化物歧化酶(SOD)檢測 Superoxide dismase (SOD) detection Xanthorin 17526-15-7 中文名: 分子式:C16H12O6 度:% 關鍵詞: 抗菌; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫
埃希氏菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒Tetracaine 136-47-0 中文名:鹽酸丁卡因 分子式:C15H25ClN2O2 Human galanin / galanin (GAL) ELISA Kit 人甘肽/甘素(GAL)ELISA試劑盒
Prilocaine 1786-81-8 中文名:鹽酸丙胺卡因 分子式:C13H21ClN2O rabbitneuroophin4,-4ELISAKit 兔子神經(jīng)營養(yǎng)因子4(-4)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
Dibucaine 1961/12/1 中文名:鹽酸地布卡因 分子式:C20H30ClN3O2 CLIAKitforA(Mouseai-thrombieceptor)ELISAKit小鼠抗凝血酶受體規(guī)格:48T/96T
Ropivacaine 98717-15-8 中文名:鹽酸羅哌卡因 分子式:C17H27ClN2O 線粒體復合物III蛋白表達ELISA定量檢測試劑盒25次
Drospirenone 67392-87-4 中文名:屈螺酮 分子式:C24H30O3 Rabbitai-Monocyteaibody,AMAELISAKit兔抗單核細胞抗體(AMA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T