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上海帛科生物技術(shù)有限公司
   
     
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加德納菌探針法熒光定量PCR試劑盒
  • 品牌:帛科
  • 產(chǎn)地:進(jìn)口、國產(chǎn)
  • 貨號:BKP6754
  • 價格: ¥3800/盒
  • 發(fā)布日期: 2020-06-22
  • 更新日期: 2024-12-24
產(chǎn)品詳請
產(chǎn)地 進(jìn)口、國產(chǎn)
品牌 帛科
貨號 BKP6754
用途 公司產(chǎn)品僅用于科研
包裝規(guī)格 50T
純度 詳見說明書%
CAS編號
是否進(jìn)口

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖:

產(chǎn)品名稱

英文名稱

貨號

加德納菌探針法熒光定量PCR試劑盒

Gardnerella vaginalis

BKP6754

概述:
產(chǎn)品僅供科研使用熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過程中,隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增,PCR產(chǎn)物不斷積累,熒光信號也會相應(yīng)的增加,這樣就可以通過熒光強(qiáng)度的變化來對PCR反應(yīng)進(jìn)行實時的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNARNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

實時熒光定量PCR
實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測的局限,實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強(qiáng)度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此,實時熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個基礎(chǔ)之上的:
1
Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期(對數(shù)期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性極好,即同一模板不同時間擴(kuò)增或同一時間不同管內(nèi)擴(kuò)增,得到的Ct值是恒定的。
2
Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系,可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進(jìn)行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確,重現(xiàn)性*的定量方法,已得到全世界的公認(rèn),廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究,藥物考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。

使用方法:
一、加德納菌探針法熒光定量PCR試劑盒稀釋PCR陽性對照(以10E2-10E7拷貝/μL610倍稀釋度為例)
1.
注意:產(chǎn)品僅供科研使用由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
2.
標(biāo)記6個離心管,分別為7,6,5,43,2。
3.
用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.
7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5.
換槍頭,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6.
換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7.
重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8.
如果有N個樣品,必須設(shè)置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?/span>10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號(濃度為1×10E4 拷貝/μL10μL相當(dāng)于1萬拷貝)或第5號(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PCNC的體積也必須是200μL
9.
用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)(20 μL體系,在樣品制備室進(jìn)行)
10.
如果只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+9PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照,6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復(fù),則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加23倍。
11.
產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加)

熒光定量PCR服務(wù):
簡介:實時熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出,該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規(guī)PCR相比,它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點(diǎn),目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化;比較不同組織的mRNA表達(dá)差異;驗證基因芯片,siRNA干擾的實驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),全部實驗皆使用進(jìn)口試劑完成,主要定量PCR儀器。
1
、熒光定量PCR服務(wù)要求:
01)請您提供新鮮的且盡量多的材料;或直接提供純化好的總RNA(大于 5 ug/樣品);或直接提供純化好的DNA(大于 5 ug/樣品)。
02)請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。
03)請?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料:DNA/RNA 來源等
2
、熒光定量PCR操作程序
01)引物(探針)設(shè)計與合成。
02)提取DNA/RNA,樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。
03)進(jìn)行Real Time PCR實驗,進(jìn)行實驗結(jié)果分析。
04)實驗完成后,提供完整的實驗報告(含軟件分析結(jié)果)及引物等實驗材料。
3
、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn):
 
我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

實驗過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA
模板
2
.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允?/span>DNA也可以是RNA,一般20bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3
10×PCR Buffer
4
2mM dNTPmix:含dATP、dCTPdGTP、dTTP2mM
5
Taq
二、操作步驟
1
.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物110pM               2μl
引物210PM              2μl
Taq
酶(2U/μl            1μl
DNA
模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O               50 μl
PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2
.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93 40s → 58 30s → 72 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72 保溫7min。
3
.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4待電泳檢測或-20長期保存。
4
PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。zui好設(shè)立一個專用的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
小鼠核因子κ B調(diào)控抑制蛋白   英文名稱:   Mouse Inhibitor κ Binding   規(guī)格:   48T/96T   英文縮寫:   IKBA  Fenazox  61618-27-7  中文名:氨芬酸鈉  分子式:C15H14NNaO4  度:98.0%  關(guān)鍵詞: 

小鼠核因子kbNF-kbELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Dexmedetomidine   中文名:鹽酸右美托咪定  分子式:C13H17ClN2  度:98.0%

小鼠合成酶elisa試劑盒   小鼠合成酶試劑盒   規(guī)格型號:96T/48T   小鼠合成酶試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:小鼠合成酶試劑盒、小鼠合成酶eisa試劑盒   保存條件:2-8   保質(zhì)期:6個月。  N-(4-Cyanophenyl)glycine  中文名:  分子式:C9H8N2O2  度:98.0%

小鼠合成酶(NOS)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           N-(Quinoxalin-2-yl)-4-(quinoxalin-2-ylamino)benzenesulfonamide  NO  中文名:  分子式:C22H16N6O2S 

小鼠合成酶(NOS)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  N-(2-Methyl-5-nitrophenyl)-4- (pyridin-3-yl)pyrimidin-2-amine  中文名:  分子式:C16H13N5O2  度:98.0%
Ambroxol   23828-92-4 
中文名:鹽酸氨溴索  分子式:C13H19Br2ClN2O  度:98.0%  關(guān)鍵詞:    小鼠類胰島素生長因子結(jié)合蛋白-3   英文名稱:   insulin-like growth factors binding protein-3   規(guī)格:   48T/96T   英文縮寫:   IGFBP-3

Ambrisentan  177036-94-1  中文名:安倍生坦  分子式:C22H22N2O4  度:98.0%  關(guān)鍵詞:    小鼠可溶性內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體(sEPCR)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Altrenogest  850-52-2  中文名:烯丙孕素  分子式:C21H26O2  度:98.0%  關(guān)鍵詞:    小鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化因子(ECF)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

alpha-Terthienylmethanol  13059-93-3  中文名:  分子式:C13H10OS3  度:關(guān)鍵詞:  中藥對照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白Eotaxin1(Eotaxin1/CCL11)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Aloin  8015-61-0  中文名:蘆薈苷  分子式:C21H22O9  度:97.5%  關(guān)鍵詞:  蘆薈; 中藥對照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISAKit   ELISA.   96T/48T
Topiramate  97240-79-4 
中文名:托吡酯  分子式:C12H21NO8S    細(xì)菌脂肪酶(LIPASE)活性比色法定量檢測試劑盒20

Olanzapine  132539-06-1  中文名:奧氮平  分子式:C17H20N4S    RabbitEndothelialniicoxidesyhase,eNOSELISAKit兔內(nèi)皮型合成酶(eNOS)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

Edaravone  89-25-8  中文名:依達(dá)拉奉  分子式:C10H10N2O    豚鼠γ干擾素(IFN-γ)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Tazobactam acid  89786-04-9  中文名:他唑巴坦酸  分子式:C10H12N4O5S    Rat vascular endothelial cell growth factor (VEGF) ELISA Kit 大鼠內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)ELISA試劑盒

Chloramphenicol  56-75-7  中文名:氯霉素  分子式:C11H12Cl2N2O5    HumanLactoferrinaibodyIgG,LF/LTFAb-IgGELISAkit 人乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白抗體IgG(LF/LTFAb-Ig)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
加德納菌探針法熒光定量PCR試劑盒1-Indanamine   32457-23-1  中文名:  分子式:C9H12ClN    Humanplasminogenactivator,PLGAELISAKit人纖溶酶原激活劑(PLGA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

Rasagiline mesylate  161735-79-1  中文名:甲磺酸雷沙吉蘭  分子式:3S    兔子血小板因子4(PF-4/CXCL4)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

4-Amino-3,5-dichloropyridine  22889-78-7  中文名:  分子式:C5H4Cl2N2    Rat angiopoietin 4 (ANG-4) ELISA Kit 大鼠生成素4(ANG-4)ELISA試劑盒

Roflumilast  162401-32-3  中文名:羅氟司特  分子式:C17H14Cl2F2N2O3    Humahyroglobulin,TGELISAKit 人甲狀腺球蛋白(TG)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Diethyl 2-acetamido-2-phenethylmalonate  5463-92-3  中文名:  分子式:C17H23NO5    HumanCytotoxin-associatedprotein,CagAELISA試劑盒人細(xì)胞相關(guān)蛋白A(CagA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T


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