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上海帛科生物技術(shù)有限公司
   
     
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七星庫道蟲探針法熒光定量PCR試劑盒
  • 品牌:帛科
  • 產(chǎn)地:進(jìn)口、國產(chǎn)
  • 貨號(hào):BKP6872
  • 價(jià)格: ¥3800/盒
  • 發(fā)布日期: 2020-06-22
  • 更新日期: 2024-12-23
產(chǎn)品詳請(qǐng)
產(chǎn)地 進(jìn)口、國產(chǎn)
品牌 帛科
貨號(hào) BKP6872
用途 公司產(chǎn)品僅用于科研
包裝規(guī)格 50T
純度 詳見說明書%
CAS編號(hào)
是否進(jìn)口

熒光定量PCR服務(wù):
簡(jiǎn)介:實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出,該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規(guī)PCR相比,它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn),目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化;比較不同組織的mRNA表達(dá)差異;驗(yàn)證基因芯片,siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成,主要定量PCR儀器。
1
、熒光定量PCR服務(wù)要求:
01)請(qǐng)您提供新鮮的且盡量多的材料;或直接提供純化好的總RNA(大于 5 ug/樣品);或直接提供純化好的DNA(大于 5 ug/樣品)。
02)請(qǐng)?zhí)峁┮阎娜L(zhǎng)基因序列。
03)請(qǐng)?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料:DNA/RNA 來源等
2
產(chǎn)品僅供科研使用熒光定量PCR操作程序
01)引物(探針)設(shè)計(jì)與合成。
02)提取DNA/RNA,樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。
03)進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn),進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。
04)實(shí)驗(yàn)完成后,提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告(含軟件分析結(jié)果)及引物等實(shí)驗(yàn)材料。
3
、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn):
 
我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖:

概述:
熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過程中,隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增,PCR產(chǎn)物不斷積累,熒光信號(hào)也會(huì)相應(yīng)的增加,這樣就可以通過熒光強(qiáng)度的變化來對(duì)PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測(cè)。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對(duì)DNARNA的熒光定量PCR監(jiān)測(cè), 實(shí)現(xiàn)基因的相對(duì)定量、定量和定性分析。

產(chǎn)品名稱

英文名稱

貨號(hào)

七星庫道蟲探針法熒光定量PCR試劑盒

Kudoa septempunctata

BKP6872

使用方法:
一、七星庫道蟲探針法熒光定量PCR試劑盒稀釋PCR陽性對(duì)照(以10E2-10E7拷貝/μL6個(gè)10倍稀釋度為例)
1.
注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照,只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對(duì)照。
2.
標(biāo)記6個(gè)離心管,分別為76,5,4,3,2。
3.
用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.
7號(hào)管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對(duì)照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對(duì)照。放冰上待用。
5.
換槍頭,在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照。放冰上待用。
6.
換槍頭,在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照到5號(hào)管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對(duì)照。放冰上待用。
7.
重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8.
如果有N個(gè)樣品,必須設(shè)置N+2個(gè)提取,多出的一個(gè)是PC(樣品制備陽性對(duì)照),一個(gè)是NC(樣品制備陰性對(duì)照)??梢杂?/span>10μL上步制備的PCR陽性對(duì)照的第4號(hào)(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于1萬拷貝)或第5號(hào)(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PCNC的體積也必須是200μL
9.
用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)(20 μL體系,在樣品制備室進(jìn)行)
10.
如果只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管,其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照,6個(gè)用于PCR陽性對(duì)照。如果做2-3次重復(fù),則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加23倍。
11.
產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對(duì)照,并且陽性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后加)

實(shí)驗(yàn)過程:
產(chǎn)品僅供科研使用一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA
模板
2
.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允?/span>DNA也可以是RNA,一般20bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3
10×PCR Buffer
4
2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP2mM
5
Taq
二、操作步驟
1
.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物110pM               2μl
引物210PM              2μl
Taq
酶(2U/μl            1μl
DNA
模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O               50 μl
PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2
.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93 40s → 58 30s → 72 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72 保溫7min。
3
.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4待電泳檢測(cè)或-20長(zhǎng)期保存。
4
PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。zui好設(shè)立一個(gè)專用的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測(cè)的局限,實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測(cè)一次熒光信號(hào)的強(qiáng)度,并記錄在電腦軟件之中,通過對(duì)每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此,實(shí)時(shí)熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的:
1
Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí),剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期(對(duì)數(shù)期),此時(shí)微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性極好,即同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增,得到的Ct值是恒定的。
2
Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對(duì)數(shù)存在線性關(guān)系,可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知樣品進(jìn)行定量測(cè)定,因此,實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確,重現(xiàn)性*的定量方法,已得到全世界的公認(rèn),廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究,藥物考核、病原體檢測(cè)等諸多領(lǐng)域。

人胚肺二倍體細(xì)胞;KMB-17 人甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL聚酰胺shēng huà shì jì容量:10毫升

人卵巢腺癌細(xì)胞;SK-OV-32,4,5-三錄本酚 2,4,5-Trichlorophqnol 92-92-4

APCS Others Human Serum amyloid P compone / APCS / SAP 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 微量可調(diào)移液器P10shēng huà shì jì容量:保存:-201

兔脂肪間質(zhì)干細(xì)胞 Rabbit adipose derived mesenchymal stem cells虎紅鈉鹽shēng huà shì jì容量:100

BE(2)-M17細(xì)胞,人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 寄生曲霉 293來源病毒包裝細(xì)胞;ΦA117-78-22-羧基醌ANTHRAinoneONE-2-CARBOXYLIC ACID
人急性T細(xì)胞細(xì)胞;Jurkat, Clone E6-1 大鼠肝動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL溴化亞銅shēng huà shì jì容量:100

角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)添加物KGS番石榴二醛 Guajadial 959860-49-2 5MG 通用試劑

CA9 Others Canine Carbonic Anhydrase IX / CA9 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) L-派啶-2-羧醋 L(-)-Pipqcolinic ccid 3102-92-1

大鼠氣管上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL間甲基紅shēng huà shì jì容量:100

CRFK細(xì)胞,貓腎細(xì)胞 SK-HEP-1(人細(xì)胞) 獼猴肺細(xì)胞;MML284-77-5鄰本二二癸酯;本二二正癸酯;鄰酞酸二正癸酯Didecyl phthalate;Di-n-decyl-o-phthalate;Convoil-20;DDP
KP-N-NS
人腎上腺神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞() KP-N-NS human adrenal neuroblastoma cells (brain metastasis) RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS重水,氧化氘(50G)Deuterium Oxide質(zhì)量規(guī)格:D,99.9%

SF763細(xì)胞,人細(xì)胞 克雷伯菌 人顱骨造骨細(xì)胞總RNAHCO NA重水,氧化氘(100G)Deuterium Oxide質(zhì)量規(guī)格:D,99.9%

RKO-AS45-1(人轉(zhuǎn)基因細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2氘代硫酸(0.55 ml x 10)Sulfuric Acid-D2質(zhì)量規(guī)格:D,99.5%, acidity 90% IN D2O

FRhK-4(恒河猴胚腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0307SW1116(人腺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 大耳山羊腎細(xì)胞;LDG-2氘代硫酸(50g )Sulfuric Acid-D2質(zhì)量規(guī)格:D, 99%, acidity 96-98% IN D2O

主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105(1ml)氘代硫酸(100g )Sulfuric Acid-D2質(zhì)量規(guī)格:D,99.5%, acidity 90% IN D2O
七星庫道蟲探針法熒光定量PCR試劑盒倉鼠腎細(xì)胞;HL-1地拉羅司,去鐵斯若Deferasirox質(zhì)量規(guī)格:>99.0%

小鼠樹突狀細(xì)胞低轉(zhuǎn)移細(xì)胞(綠色熒光蛋白標(biāo)記);DG6-GFP 小鼠內(nèi)臟脂肪細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL地拉羅司(標(biāo)準(zhǔn)品)Deferasirox質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

HET-1A, 人食管上皮細(xì)胞 Human利培酮Risperidone質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

CD209B Others Mouse 小鼠 CD209B / DC-SIGNR1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 利培酮(標(biāo)準(zhǔn)品)Risperidone質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品

人顱骨造骨細(xì)胞裂解物HCOL利托那韋(標(biāo)準(zhǔn)品)Ritonavir質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品


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