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上海帛科生物技術(shù)有限公司
   
     
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折光馬爾太蟲探針法熒光定量PCR試劑盒
  • 品牌:帛科
  • 產(chǎn)地:進(jìn)口、國產(chǎn)
  • 貨號:BKP6914
  • 價格: ¥3800/盒
  • 發(fā)布日期: 2020-06-22
  • 更新日期: 2024-12-23
產(chǎn)品詳請
產(chǎn)地 進(jìn)口、國產(chǎn)
品牌 帛科
貨號 BKP6914
用途 公司產(chǎn)品僅用于科研
包裝規(guī)格 50T
純度 詳見說明書%
CAS編號
是否進(jìn)口

概述:
熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過程中,隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增,PCR產(chǎn)物不斷積累,熒光信號也會相應(yīng)的增加,這樣就可以通過熒光強(qiáng)度的變化來對PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時的監(jiān)測。產(chǎn)品僅供科研使用本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNARNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實(shí)現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

產(chǎn)品名稱

英文名稱

貨號

折光馬爾太蟲探針法熒光定量PCR試劑盒

Marteilia refringens

BKP6914

實(shí)時熒光定量PCR
實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測的局限,實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強(qiáng)度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此,實(shí)時熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個基礎(chǔ)之上的:
1
Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期(對數(shù)期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性極好,即同一模板不同時間擴(kuò)增或同一時間不同管內(nèi)擴(kuò)增,得到的Ct值是恒定的。
2
Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系,可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進(jìn)行定量測定,因此,實(shí)時熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確,重現(xiàn)性*的定量方法,已得到全世界的公認(rèn),廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究,藥物考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖:

使用方法:
一、折光馬爾太蟲探針法熒光定量PCR試劑盒稀釋PCR陽性對照(以10E2-10E7拷貝/μL610倍稀釋度為例)
1.
注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
2.
標(biāo)記6個離心管,分別為7,6,5,43,2。
3.
用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.
7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5.
換槍頭,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6.
換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7.
重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8.
如果有N個樣品,必須設(shè)置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?/span>10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于1萬拷貝)或第5號(濃度為1×10E5 拷貝/μL10μL相當(dāng)于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PCNC的體積也必須是200μL。
9.
用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)(20 μL體系,在樣品制備室進(jìn)行)
10.
如果只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+9PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照,6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復(fù),則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加23倍。
11.
產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加)

熒光定量PCR服務(wù):
產(chǎn)品僅供科研使用簡介:實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出,該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規(guī)PCR相比,它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點(diǎn),目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化;比較不同組織的mRNA表達(dá)差異;驗證基因芯片,siRNA干擾的實(shí)驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),全部實(shí)驗皆使用進(jìn)口試劑完成,主要定量PCR儀器。
1
、熒光定量PCR服務(wù)要求:
01)請您提供新鮮的且盡量多的材料;或直接提供純化好的總RNA(大于 5 ug/樣品);或直接提供純化好的DNA(大于 5 ug/樣品)。
02)請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。
03)請?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料:DNA/RNA 來源等
2
、熒光定量PCR操作程序
01)引物(探針)設(shè)計與合成。
02)提取DNA/RNA,樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。
03)進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗,進(jìn)行實(shí)驗結(jié)果分析。
04)實(shí)驗完成后,提供完整的實(shí)驗報告(含軟件分析結(jié)果)及引物等實(shí)驗材料。
3
、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn):
 
我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。
家貓肺細(xì)胞;FCA-L1Cefazolinwo7iumsalt頭孢拉定V1USP

HCCC-9810細(xì)胞,膽管細(xì)胞型細(xì)胞 人二倍體細(xì)胞系,HL細(xì)胞 小鼠細(xì)胞;Hepa 1-6 [Hepa1-6]三四胺六乙酸 TTHA,98.0% 869-52-3 1G 通用試劑

小鼠B細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞;W6/32血紅蛋柏(,分末) HqMOGLOBIN 9047-09-0

RTN4R Others Mouse 小鼠 Nogo Receptor 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) X-GLUC5--4--3-吲哚-β-D-葡萄糖苷 (X-Gluc)超級白色結(jié)晶粉末FROZENsigma

人間充質(zhì)干細(xì)胞-骨髓裂解物HMSC-bm L二本基二錄硅烷;二本基二錄化硅;二錄二本基硅烷Dipxenyldichlorosilane;Dichlorodipxenylsilane
HCT 116(
人細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0401NCI-H446(人小細(xì)胞細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 非洲綠猴腎細(xì)胞系/IgRCD4-;VERO/IgRCD4-RAPIDWESTERNBLOTTINGKIT-RABBIT-WT快速Western Blotting試劑盒-(濕轉(zhuǎn))FROZENsigma

/死細(xì)胞染色試劑盒CSK1,2-炳二醇二醋酯 1,2-Propylqnqglycol diccqtctq 63-84-7

GFRA1 Others Canine GFRA1 / GFR alpha-1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 基鈷安速(-20) Mqcobclcmin 134-22-4

人類原巨核細(xì)胞型細(xì)胞;UT-7天青B,英文名或英文縮寫:Azure B,級別:高,90%,規(guī)格:25

HHCC細(xì)胞,人細(xì)胞 小鼠細(xì)胞,Lewis細(xì)胞 牦牛皮膚細(xì)胞;BMU-S1344-25-2D-脯酸D-Proline;(R)-Pyrrolidine-2-carboxylic acid;(R)-(+)-Proline;D-Pro
骨細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105(1ml)熒光桃紅B,酸性紅92Phloxine B質(zhì)量規(guī)格:AR

U937細(xì)胞,人組織細(xì)胞瘤細(xì)胞 小鼠細(xì)胞,NS1細(xì)胞 人表皮色素細(xì)胞-淺色素cDNAHEM-l cDNA依萊鉻紅BEriochrome Red B質(zhì)量規(guī)格:AR

NCI-H838(人非小細(xì)胞細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2固紅RLFast Red RL Salt質(zhì)量規(guī)格:>90%,BR

CoC1/DDP(人卵巢耐藥細(xì)胞亞株) 5×106cells/瓶×2 CL-0150MDA-MB-231(人癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 Walker氏癌256瘤株;W256固紅紫色LBFast Red Violet LB Salt質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR

中國倉鼠卵巢細(xì)胞;CHO莧菜紅Amaranth質(zhì)量規(guī)格:BS
折光馬爾太蟲探針法熒光定量PCR試劑盒人胎盤羊膜細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL醋酸Hydrocortisone Acetate質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR

SAC-II B2細(xì)胞,小鼠腹水瘤細(xì)胞 BRL 3A(大鼠肝細(xì)胞) 人皮膚成纖維細(xì)胞;CCC-HSF-1醋酸(標(biāo)準(zhǔn)品)Hydrocortisone Acetate質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

CCL11 Protein Human 重組人 CCL11 蛋白 (His 標(biāo)簽)鹽酸伊達(dá)比星IdarubicinHCl質(zhì)量規(guī)格:含量960~1030μg/mg,USP30

RD(人惡性胚胎橫紋肌瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 Angiopoietin-2 / ANG2 / ANGPT2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 甲磺酸伊馬替尼Imatinib Mesylate質(zhì)量規(guī)格:>99.0%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

人結(jié)膜細(xì)胞裂解物HConFL甲磺酸伊馬替尼(標(biāo)準(zhǔn)品)Imatinib Mesylate質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
實(shí)驗過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA
模板
2
.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允?/span>DNA也可以是RNA,一般20bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3
10×PCR Buffer
4
2mM dNTPmix:含dATP、dCTPdGTP、dTTP2mM
5
Taq
二、操作步驟
1
.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物110pM               2μl
引物210PM              2μl
Taq
酶(2U/μl            1μl
DNA
模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O               50 μl
PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2
.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93 40s → 58 30s → 72 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72 保溫7min。
3
.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4待電泳檢測或-20長期保存。
4
PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。zui好設(shè)立一個專用的PCR實(shí)驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。


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