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| 產(chǎn)地 | 進口、國產(chǎn) |
| 品牌 | 帛科 |
| 貨號 | BKP7120 |
| 用途 | 公司產(chǎn)品僅用于科研 |
| 包裝規(guī)格 | 50T |
| 純度 | 詳見說明書% |
| CAS編號 | |
| 是否進口 | 是 |
熒光定量PCR服務：
簡介：實時熒光定量PCR技術于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務要求：
（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。
（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。
（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等
2、產(chǎn)品僅供科研使用熒光定量PCR操作程序
（01）引物（探針）設計與合成。
（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉錄成cDNA。
（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結果分析。
（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結果）及引物等實驗材料。
3、熒光定量PCR的收費標準：
我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準。
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：
概述：
熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號也會相應的增加，這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應進行實時的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
熒光假單胞菌探針法熒光定量PCR試劑盒 | Pseudomonas fluorescens | BKP7120 |
使用方法：
一、熒光假單胞菌探針法熒光定量PCR試劑盒稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
2. 標記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品，必須設置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?/span>10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設置qPCR反應（20 μL體系，在樣品制備室進行）
10. 如果只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復，則反應設置數(shù)量相應增加2或3倍。
11. 產(chǎn)品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）
實驗過程：
產(chǎn)品僅供科研使用一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允?/span>DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。
實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性極好，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現(xiàn)性*的定量方法，已得到全世界的公認，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物考核、病原體檢測等諸多領域。
Jurkat, Clone E6-1人T細胞細胞 Jurkat, Clone and E6-1 in human T lymphocyte leukemia cell RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS1,5-萘二磺酸四水(>98%,BR)質量規(guī)格：>98%Naphthalene-1,5-disulfonic acid tetrahydrate
FGF17 Protein Human 重組人 FGF17 蛋白色酚AS醋酸鹽(>98%,BC)質量規(guī)格：>98%,BCNaphthol AS acetate
BC3H1(小鼠細胞) 5×106cells/瓶×2 人表皮角質細胞-HEK-a氯代丁二乙(>98%,BR)質量規(guī)格：>98%,BRNCS, N-Chlorosuccinimide
人細胞;MKN-45n-Dodecyl-b-D-thiomaltoside質量規(guī)格：BRn-Dodecyl-b-D-thiomaltoside
人卵巢微內皮細胞(HOMEC) ( 5×105 )1,4-雙[(1H-咪唑-1-基)甲基]苯(>98.0%(GC))質量規(guī)格：>98.0%(GC)1,4-Bis[(1H-imidazol-1-yl)methyl]benzene
Caki-2 人腎透明細胞癌細胞 Caki-2 human renal clear cell carcinoma cells McCoy's 5A Media (Modified with icine) 10%FBSHRP標記羊抗馬IgG250克
EGFL7 Protein Mouse 重組小鼠 EGFL7 / VE-statin 蛋白 (His 標簽)1-拂-2-肖基本 1-Fluoro-2-nitnobqnzqnq 1493-7-
TG-905(人腦膠質母細胞瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 微內皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)D-GLUCOSE,ANxy7noUSD-葡萄糖,無水生物技術級白色精細粉末RTsigma
大鼠海馬神經(jīng)元RN-hxy7noGENPEROXIDEACS級透明無色液體COLD不sigma
TAOK3 Others Human 人 TAOK3 / JIK / MAP3K18 (aa 1-411) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 5337-93-94-甲基本4'-metxylpropiopxenone
小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-B2酸性紫49Acid Violet 49質量規(guī)格：IND,進分
HGF Others Mouse 小鼠 HGF / Hepatocyte Growth Factor 人細胞裂解液 (陽性對照) 皂黃Metanil yellow質量規(guī)格：AR
原代心肌細胞特制無血清添加劑Many types of cells包裝：1ml橙黃G；酸性橙10Orange G質量規(guī)格：BS
HUVEC(原代)細胞，人臍內皮細胞 HPVl6 E6、E7和ras基因共轉化的C57BL/C(H-2b)小鼠肺上皮細胞,TC-1細胞 人雪旺細胞總RNAHSC NA橙黃ⅡOrangeⅡ質量規(guī)格：AR
QGY-7703(人細胞) 5×106cells/瓶×2柯衣定Chrysoidin質量規(guī)格：AR
熒光假單胞菌探針法熒光定量PCR試劑盒人表皮角質細胞cDNAHEK cDNA培美曲塞-15N,13C5Pemetrexed - Labeled 15N,13C5質量規(guī)格：美國進口
RPE Others Mouse 小鼠 RPE / RPE2-1 人細胞裂解液 (陽性對照) N-硝基-L-精氨酸甲酯N'-Nitro-L-arginine-methyl ester hydrochloride質量規(guī)格：>98%
人脂肪細胞完全培養(yǎng)基 100mLN-苯甲酰-L-酪氨酸乙酯(BTEE)N-Benzoyl-L-tyrosine ethyl ester質量規(guī)格：>98%
ZA1細胞，轉S9基因倉鼠卵巢細胞 PC-12未分化(大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤) 中國倉鼠肺細胞;R 1610 [R1610]AEBSF絲氨酸抑制劑AEBSF HCl質量規(guī)格：>98%,BR
EFNA2 Protein Mouse 重組小鼠 Ephrin-A2 / EFNA2 蛋白AEBSF(進分)AEBSF HCl質量規(guī)格：>97%,進分TCI A2215
