產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) |
保存條件 | 低溫冷藏 |
品牌 | 帛科 |
貨號(hào) | E0056 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用于科研 |
組織來源 | 白細(xì)胞;EBV轉(zhuǎn)化 |
細(xì)胞形態(tài) | 詳見說明書 |
是否是腫瘤細(xì)胞 | 否 |
CAS編號(hào) | |
保質(zhì)期 | 詳見說明書 |
器官來源 | 詳見說明書 |
免疫類型 | 詳見說明書 |
品系 | 詳見說明書 |
生長(zhǎng)狀態(tài) | 貼壁 |
物種來源 | 人 |
包裝規(guī)格 | 瓶 |
純度 | 詳見說明書% |
是否進(jìn)口 | 是 |
產(chǎn)品簡(jiǎn)稱:B95-8細(xì)胞
中文名稱:絨猴EBV轉(zhuǎn)化的白細(xì)胞
規(guī)格:瓶
種屬:絨猴
來源:白細(xì)胞;EBV轉(zhuǎn)化
培養(yǎng)基:1640
狀態(tài):懸浮
單位:
貨號(hào):E0056
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
B95-8細(xì)胞 | 瓶 | E0056 |
帛科細(xì)胞培養(yǎng)器材的選擇:從培養(yǎng)量大小來講,從小到大有細(xì)胞培養(yǎng)板、細(xì)胞反應(yīng)管、搖瓶、細(xì)胞培養(yǎng)瓶、細(xì)胞工廠等,更大就是反應(yīng)器了。
帛科細(xì)胞培養(yǎng)瓶培養(yǎng)面積從25-225平方厘米不等,一般都經(jīng)過表面改性處理,適合細(xì)胞貼壁和生長(zhǎng)。225ml 、175ml的多用于大規(guī)模培養(yǎng)時(shí)用(如單克隆細(xì)胞的培養(yǎng)等),75ml的多用于一般性細(xì)胞實(shí)驗(yàn)用(一般性的傳代,保存細(xì)胞,為實(shí)驗(yàn)提供細(xì)胞等),25ml一般是用來復(fù)蘇細(xì)胞或細(xì)胞較少時(shí)的培養(yǎng),還有做原代細(xì)胞時(shí)也可以做多瓶而避免交叉污染。產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞培養(yǎng)的具體步驟和注意事項(xiàng):
1.細(xì)胞復(fù)蘇
將凍存細(xì)胞從液氮中取出后,在37℃水浴鍋內(nèi)不斷搖動(dòng)促進(jìn)其融化。將融化的細(xì)胞移入離心管中,加入37oC預(yù)熱的DMEM完全培養(yǎng)基中(其中胎牛血清約為10%),輕輕吹勻,離心,500g離心2min,棄上清液。
加入DMEM完全培養(yǎng)基清洗,棄上清液。加入DMEM完全培養(yǎng)基,輕輕吹打混勻,制成細(xì)胞懸液,接種于培養(yǎng)皿/瓶中,在含5% CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
2.細(xì)胞傳代
帛科細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%(過量不足,過晚細(xì)胞狀態(tài)不佳,1:2至1:10以上的比率傳代培養(yǎng),一般1:3至1:5細(xì)胞一代,即從細(xì)胞接種到分離再培養(yǎng)的一段時(shí)間,非細(xì)胞有絲分裂次數(shù))時(shí),去掉完全培養(yǎng)基,用1X PBS清洗2次。
加入胰蛋白酶(注意:消化液的量以蓋住細(xì)胞*,*消化溫度是37oC。顯微鏡下觀察細(xì)胞:倒置顯微鏡下觀察消化細(xì)胞,若胞質(zhì)回縮,細(xì)胞之間不再連接成片,表明此時(shí)細(xì)胞消化適度)進(jìn)行消化,放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中約2-3min。
加入適量DMEM完全培養(yǎng)基終止胰蛋白酶消化,轉(zhuǎn)移至離心管后500g離心2min,棄上清液,再加入DMEM完全培養(yǎng)基清洗,棄上清液。
加入DMEM完全培養(yǎng)基,輕輕吹打混勻,吸取10微升進(jìn)行計(jì)數(shù),然后按照所需細(xì)胞量在含5% CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。
3.細(xì)胞凍存
當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%時(shí),去掉完全培養(yǎng)基,用1X PBS清洗2次。加入胰蛋白酶進(jìn)行消化,放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中約2-3min。加入DMEM完全培養(yǎng)基終止胰蛋白酶消化,轉(zhuǎn)移至離心管后500g離心2min,棄上清液,再加入DMEM完全培養(yǎng)基清洗,棄上清液。加入lml凍存液(90%胎牛血清,10% DMSO。
一般來講血清含量可以在10%-90%之間調(diào)整,凍存液中加入血清一方面可以為細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng),另一方面可以在細(xì)胞凍存過程中提供非滲透性保護(hù)物質(zhì),如蔗糖,白蛋白等從而更好地保護(hù)細(xì)胞),放入凍存管內(nèi)(管內(nèi)有異丙醇,以保證溫度降低的速度),立即放入4oC冰箱中凍存30min,然后放入-20oC冰箱中凍存30min,再置于-80℃冰箱內(nèi)過夜。
*天放入液氮中,可以保存至少兩年,如不放人液氮,可以保存三個(gè)月。
細(xì)胞凍存和復(fù)蘇的原則是:慢凍速融,這樣更加有利于保持細(xì)胞的活力。凍存細(xì)胞不加任何保護(hù)劑,會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)冰晶的產(chǎn)生,從而使細(xì)胞產(chǎn)生內(nèi)源性的機(jī)械損傷,引起細(xì)胞內(nèi)環(huán)境滲透壓,PH,電解質(zhì)等的改變,進(jìn)而促使細(xì)胞死亡。
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外消旋4-羥基-9-順式-視黃酸 rac 4-Hydroxy-9-cis-retinoic Acid 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口 英文名稱Mouseα1-AcidglycoproteinELISAKit小鼠α1-酸性糖蛋白(α1-AGP)規(guī)格:96T/48T
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4-酮基9-順式-甲酯視黃酸 4-Keto 9-cis Retinoic Acid Methyl Ester 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口 英文名稱RaeceptoractivatorofnuclearfactorkappaBligandELISAKit大鼠核因子活化因子受體配體(RANKL)規(guī)格:96T/48T
全反式 5,6-環(huán)氧視黃酸 all-trans 5,6-Epoxy Retinoic Acid 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口 英文名稱RaeceptoractivatorofnuclearfactorkappaBligandELISAKit大鼠核因子活化因子受體配體(RANKL)規(guī)格:96T/48T
9-順式-視黃酸 9-cis-Retinoic acid 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口 英文名稱RaesistinElisakit大鼠抵抗素(Resistin)Elisakit規(guī)格:96T/48T
4-酮基13-順式-視黃酸 4-Keto 13-cis-Retinoic Acid 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口 英文名稱RaesistinElisakit大鼠抵抗素(Resistin)Elisakit規(guī)格:96T/48T
4-酮基9-順式視黃酸 4-Keto 9-cis Retinoic Acid 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口 英文名稱RatAbELISAKit大鼠抗促甲狀腺素受體抗體(Ab)規(guī)格:96T/48T
人病毒6型(HHV-6)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T Annonacin 中文名: 分子式:C35H64O7 度:97.0%
人凝血因子V抗原 英文名稱: Human Vcoagulation factor 5 Aigen 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: F5-Ag 4-[2-[(3-Ethyl-4-methyl-2-oxo-3-pyrrolin-1-yl)carboxamido]ethyl]benzenesulfonamide 中文名: 分子式:C16H21N3O4S
人凝血因子Ⅶ(FⅦ)ELISAKit Capecitabine 中文名:卡培他濱 分子式:C15H22FN3O6 度:98.0%
人凝血酶(TM)ELISAKit Capecitabine 2',3'-diacetate 162204-20-8 中文名: 分子式:C19H26FN3O8
人末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TdT)ELISAKit 2-Aminonicotinic acid 中文名:2-氨基煙酸 分子式:C6H6N2O2
B95-8細(xì)胞4,4'-Bis(2-benzoxazolyl)stilbene 1533-45-5 中文名:4,4'-雙(2-苯并惡唑基)芪 分子式:C28H18N2O2 十六烷基-二甲基-乙基-溴化銨 50g
1,4-Bis(2-benzoxazolyl)naphthalene 5089-22-5 中文名:1,4-雙(2-苯并惡唑基)萘 分子式:C24H14N2O2 CetyldimethylethylAmmoniumBromide 100g
4,4'-Diaminodiphenylsulfone 80-08-0 中文名:4,4'-二氨基二苯砜 分子式:C12H12N2O2S 化十六烷基 100g
9,9-Bis(4-hydroxyphenyl)fluorene 3236-71-3 中文名:9,9-雙(4-羥苯基)芴 分子式:C25H18O2 CetylpyridniumChloride,Monohydrate 500g
Bis(4-bromophenyl)acetylene 2789-89-1 中文名:二(4-溴苯基)乙炔 分子式:C14H8Br2 生長(zhǎng)因子 英文名稱: Human Growth Factor 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: GF
注意事項(xiàng):
B95-8細(xì)胞(1)預(yù)熱培養(yǎng)用液:把已經(jīng)配制好的裝有培養(yǎng)液、PBS和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱;
(2)用75%酒精擦拭經(jīng)過紫外線照射的超凈工作臺(tái)和雙手;
(3)正確擺放使用的器械:保證足夠的操作空間,不僅便于操作而且減少污染;
(4)點(diǎn)燃酒精燈:注意火焰不能太??;
(5)嚴(yán)格的無菌操作;
(6)貼壁細(xì)胞消化適度:消化的時(shí)間受消化液的種類、配制時(shí)間、加入培養(yǎng)瓶中的量等諸多因素的影響,消化過程中應(yīng)該注意培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)的變化,一旦胞質(zhì)回縮,連接變松散,或有成片浮起的跡象就要立即終止消化;
(7)傳代細(xì)胞所有的操作盡量靠近酒精燈火焰。每次*只進(jìn)行一種細(xì)胞的操作,每種細(xì)胞使用一套器材。避免交叉感染;
(8)傳代細(xì)胞瓶口每次打開或者關(guān)閉都需要在酒精燈上消毒。