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PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達量。

特點優(yōu)勢：
1. 特異性：禽痘病毒PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

WI-38人胚肺細胞 WI-38 in human embryo lung cells MEM培養(yǎng)基(GIBCO)+10%FBS磺胺100克

MSTN Protein Mouse 重組小鼠 GDF-8 / Myostatin / MSTN 蛋白 (Fc 標簽)6-羌基多巴安輕溴醋鹽 95% 6-xy7noXYDOPcMINq xy7noBROMIDq 636-00-0

人成纖維細胞(HPrF)(5×105) 人絨毛膜間充質(zhì)基質(zhì)細胞 HumanA.C.E.BUFFER1X,TINTEDA.C.E. 測序緩沖液 (1X 帶顏色)測序級1LRT

tTA基因修飾的小鼠細胞(B類);Pan02-CAG-tTA-3E6MITOCHONDRIALPROTEINISOLATIONBUFFER線粒體蛋白分離緩沖液蛋白組學(xué)級30mlCOLD

人腦膜細胞 (HMC)( 5×105 )5625-37-6-N,N'-二(2-乙磺酸)pipes
小鼠T細胞瘤細胞;Cyc-Tag(S49)司帕沙星Sparfloxacin質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR,可用于細胞培養(yǎng)

CD40 Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 CD40 / TNFRSF5 人細胞裂解液 (陽性對照) 司帕沙星（標準品）Sparfloxacin質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品

U251人細胞 Human glioma cell line U251 DMEM+10% FBS氟喹酮Afloqualone質(zhì)量規(guī)格：>98%

U251細胞，人神經(jīng)細胞 滑假絲酵母 人海馬趾神經(jīng)元RNAHN-h miRNA5 μg氟喹酮(標準品)Afloqualone質(zhì)量規(guī)格：>98%,標準品

RT4(人膀胱移行細胞瘤細胞) 5×106cells/瓶×2磺胺醋酰鈉 SA-NASufacetamide 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR
禽痘病毒PCR檢測試劑盒說明書內(nèi)臟脂肪細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)脫氫吲達帕胺Dehydro Indapamide質(zhì)量規(guī)格：美國進口

TFPI2 Others Mouse 小鼠 TFPI2 / PP5 人細胞裂解液 (陽性對照) CHPS-Na；3-氯-2-羥基丙磺酸鈉CHPS-Na質(zhì)量規(guī)格：>98.5%

大鼠主動脈平滑肌細胞完全培養(yǎng)基 100mLSBES；2-溴乙基磺酸鈉 2-bromoethanesulphonate質(zhì)量規(guī)格：>98.5%

293-L.P.人胚腎細胞 Human embryonic kidney cell line 293-L.P. MEM+10% FBSBICINE；N,N-二羥乙基甘氨酸BICINE質(zhì)量規(guī)格：>99%

IFNG Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 / 恒河猴 IFNG / Ierferon Gamma 蛋白BES  salt; N,N-二(2-羥乙基)-2-氨基乙磺酸鈉BES  Salt質(zhì)量規(guī)格：>99%
人羊膜細胞;WISH4-十八烷氧基苯(>95.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)4-Octadecyloxybenzaldehyde

LSAMP Others Human 人 LSAMP 人細胞裂解液 (陽性對照) 4-丙氧基苯(>97.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC)4-Propoxybenzaldehyde

HCT 116 人細胞4'-丁基苯乙酮(>97.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC)4'-Butylacetophenone

OS-RC-2人細胞 Human renal cell carcinoma OS-RC-2 cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS4'-丁氧基苯乙酮(>98.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)4'-Butoxyacetophenone

TNFSF13B Protein Human 重組人 BLyS / TNFSF13B / BAFF 蛋白4-酮基9-順式-甲酯視黃酸質(zhì)量規(guī)格：美國進口4-Keto 9-cis Retinoic Acid Methyl Ester
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應(yīng)嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。