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技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達(dá)量。

PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

特點優(yōu)勢：
1. 特異性：博茲曼熒光桿菌PCR檢測試劑盒直銷使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。
IFNG Others Mouse 小鼠 IFNG / Ierferon Gamma 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) RAFFINOSEPENTAHYDRATE綿子糖,五水超級100G17629-30-0RT

L6565 小鼠克隆細(xì)胞系丁醋縮水甘油酯 96% (R)-Glycidyl butyrctq 60426-6-0

HEC-1-B人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞 HEC-1-B human endomeial adenocarcinoma cells MEM培養(yǎng)基(GIBCO)+10%FBSL-蘇安醋;L-異赤絲藻安基醋 L-Thrqoninq;L-β-xy7noxy-2-cMinobutyric ccid;(2S,3R)-2-cMino-3-xy7noxybutyric ccid;(2S,3R)-(-)-Thrqoninq 7-19-2

LGALS1 Protein Rat 重組大鼠 Galectin-1 / LGALS1 蛋白WESTERNMAX,HRPCHROMKIT,MOUSE辣根酶發(fā)光檢測試劑盒,小鼠01 KitCOLD

小鼠心肌細(xì)胞(MCM)(1×106) QGY-7701, 人細(xì)胞 Human108-01-0N，N-二甲基(XZ)N,N-Dimetxylethanolamine
小鼠紅細(xì)胞;MEL煙酰胺二核苷酸鈉鹽Nicotinamide hypoxanthine dinucleotide  salt質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

MMP9 Others Human 人 MMP-9 / CLG4B 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) N-(1,3,4-Thiadiazolyl)煙酰胺N-(1,3,4-Thiadiazolyl)nicotinamide質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

敘利亞倉鼠腎細(xì)胞;BHK-21β-煙酰胺單核苷酸β-Nicotinamide mononucleotide質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

HA Others Influenza B 乙型 (B/Brisbane/60/2008) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 環(huán)丙孕酮Cyproterone質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

JM 人急性T細(xì)胞細(xì)胞15β-羥基醋酸環(huán)丙孕酮15β-Hydroxy Cyproterone Acetate質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
博茲曼熒光桿菌PCR檢測試劑盒直銷mOPC, 小鼠少突膠質(zhì)前體細(xì)胞 Mouse槲皮苷(標(biāo)準(zhǔn)品）Quercitrin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

EM1 Others Human 人 EM1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) β-谷甾醇β-Sitosterol質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

人惡性色素瘤細(xì)胞;A-375 [A375]光甘草定Glabridin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

人成纖維母細(xì)胞-新生兒(HDF-n)( 5×105 )鬼臼（標(biāo)準(zhǔn)品）Podophyllotoxin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

mRTEC, 小鼠腎小管上皮細(xì)胞鬼臼(95%)Podophyllotoxin質(zhì)量規(guī)格：HPLC>95%,BR
大鼠嗜堿性粒細(xì)胞性細(xì)胞;RBL-1 膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞，A172細(xì)胞 Tb 1 Lu細(xì)胞，蝙蝠肺細(xì)胞4'-羥基鹽酸曲唑酮質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口4'-Hydroxy Trazodone HCl

MCF-7 [MCF7], 人癌細(xì)胞系 Human鹽酸伐倫克林標(biāo)記15N3質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口Varenicline Hydrochloride Labeled 15N3

CD2 Others Mouse 小鼠 CD2 / LY37 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 內(nèi)酰胺伐倫克林質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口Varenicline Lactam

少突膠質(zhì)前體細(xì)胞培養(yǎng)基OPCM羥基伐倫克林質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口Hydroxy Varenicline

IGFBP2 Others Cynomolgus 食蟹猴 IGFBP2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) N-氧基匹格列酮質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口Pioglitazone N-Oxide