產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP4485 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進(jìn)口 | 是 |
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
透明毛圓線蟲PCR檢測試劑盒直銷 | Trichostrongylus vitrinusPCR | BKP4485 |
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達(dá)量。
特點(diǎn)優(yōu)勢:
1. 特異性:透明毛圓線蟲PCR檢測試劑盒直銷使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實(shí)用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個(gè)檢測過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
Benzophenone 中文名:二苯甲酮 分子式:C13H10O 度:98.0% 小鼠白介素3(IL-3)ELISAKit ELISA. 96T/48T
Coumarin 7 中文名:香豆素 7 分子式:C20H19N3O2 度:98.0% 小鼠白介素4(IL-4)ELISAKit ELISA. 96T/48T
Aspartame 中文名:阿司帕坦 分子式:C14H18N2O5 度:98.0% 小鼠白介素-5(IL-5)ELISAKit ELISA. 96T/48T
Aripiprazole 中文名:阿立哌唑 分子式:C23H27Cl2N3O2 度:98.0% 小鼠白介素15(IL-15)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
1,6-Anhydro-β-D-glucose 中文名:1,6-脫水-β-D-葡萄糖 分子式:C6H10O5 度:98.0% 小鼠白介素13(IL-13)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
豚鼠組胺(HIS)ELISAKit ELISA. 96T/48T Altrenogest 850-52-2 中文名:烯丙孕素 分子式:C21H26O2
豚鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1elisa試劑盒 豚鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 豚鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:豚鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1試劑盒、豚鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1eisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。 Amorolfine 78613-38-4 中文名:鹽酸阿莫洛芬 分子式:C21H36ClNO
豚鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 Amorolfine 67467-83-8 中文名:阿莫羅芬 分子式:C21H36ClNO
豚鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)ELISAKit ELISA. 96T/48T alpha-Terthienylmethanol 中文名: 分子式:C13H10OS3 度:%
豚鼠主要組織相容性復(fù)合體elisa試劑盒 豚鼠主要組織相容性復(fù)合體試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 豚鼠主要組織相容性復(fù)合體試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:豚鼠主要組織相容性復(fù)合體試劑盒、豚鼠主要組織相容性復(fù)合體eisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。 Lenalidomide 191732-72-6 中文名:來那度胺 分子式:C13H13N3O3
透明毛圓線蟲PCR檢測試劑盒直銷ICAM1 Others Human 人 ICAM-1 / CD54 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 苉(升華提)質(zhì)量規(guī)格:>99.5%(GC)Picene (purified by sublimation)
中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-DUKXB11-TGF-β Dinding Protein cDNA5,6,11,12-四苯基并四苯(升華提)質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC)5,6,11,12-Tetraphenylnaphthacene (purified by sublimation)
13. 肝臟細(xì)胞系統(tǒng)1,2,3,4,8,9,10,11,15,16,17,18,22,23,24,25-十六氟酞菁銅(II)(以升華法化)質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(N)(T)1,2,3,4,8,9,10,11,15,16,17,18,22,23,24,25-Hexadecafluorophthalocyanine Copper(II) (purified by sublimation)
CL-0075DU 145(人細(xì)胞)5×106cells/瓶×23,4,9,10-苝四羧酸二酐(>98.0%(T))質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(T)3,4,9,10-Perylenetetracarboxylic Dianhydride
小鼠胚胎成骨細(xì)胞前體細(xì)胞;MC3T3-E1 大鼠脈絡(luò)膜細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL苔酚葡萄糖苷;地衣二醇葡萄糖苷(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥97%,標(biāo)準(zhǔn)品Orcinol glucosid
CCL21 Others Human 人 CCL21 / 6Ckine 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 脒shēng huà shì jì容量:1米
人細(xì)胞;Hela S3 [HeLaS3]2-溴-2-基炳酰溴 2-Bromo-2-mqthylpropionyl bromidq 0769-82-1
A-431細(xì)胞,表皮癌細(xì)胞 人耐VCR胃腺癌細(xì)胞,SGC-7901/VCR細(xì)胞 豬小腸上皮細(xì)胞;ZYM-DIEC02戊酸,英文名或英文縮寫:Valeric acid,級別:CP,98%,規(guī)格:100克
tTA基因修飾的小鼠細(xì)胞(B類);Pan02-CAG-tTA-3E6順丁希二酸鈉250毫克2~8℃
SERPINF1 Others Mouse 小鼠 SerpinF1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 135145-90-32,5-二錄本硼酸2,5-Dichloropxenylboronic acid
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。